土壤酸性轉(zhuǎn)化酶 (S-AI) 活性檢測試劑盒
可見分光光度法
注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 25mL 試劑一充分溶解備用；用不完的試劑 4℃保存； 試劑三：液體 20mL×1 瓶，4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 支，4℃保存，10mg 無水葡萄糖。臨用前加入 1mL 試劑一溶解,制備 10mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液備用。
產(chǎn)品說明：
S-AI 在 pH 為 4.5~5.0 (酸性) 條件下催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗 糖代謝關(guān)鍵酶之一。
S-AI 催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖，進(jìn)一步與 3,5－二硝基水楊酸反應(yīng)，生成棕紅色氨基化合物， 在 540nm 有特征光吸收，在一定范圍內(nèi) 540nm 光吸收增加速率與 AI 活性成正比。
試驗中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計、臺式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水、甲苯。
操作步驟：
一、樣品處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或 37℃烘箱風(fēng)干，過 30~50 目篩。
二、測定步驟及加樣表：
1 、分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min ，波長調(diào)至 540nm ，蒸餾水調(diào)零。
2 、標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋：將 10mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液用試劑一稀釋至 4 、3 、2 、1 、0.8 、0.6 mg/mL 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
3 、加樣表：
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
土樣 (g) | 0.1 | 0.1 | - | - |
試劑一 (μL) | - | 800 | - | 800 |
試劑二 (μL) | 800 | - | - | - |
標(biāo)準(zhǔn)液 (μL) | - | - | 800 | - |
甲苯 (μL) | 20 | 20 | 20 | 20 |
混勻，37℃準(zhǔn)確水浴 1h 后，煮沸 10min 左右 (蓋緊，以防止水分散失) ，流水或冰浴冷 | ||||
卻后充分混勻 (以保證濃度不變) ，10000rpm，常溫離心 10min，取上清 150μL 與 600μL 試 劑一混合即將上清液稀釋 5 倍。 | ||||
上清稀釋液 (μL) | 700 | 700 | 700 | 700 |
試劑三 (μL) | 300 | 300 | 300 | 300 |
混勻，煮沸 10min 左右 (蓋緊，以防止水分流失) ，流水冷卻后充分混勻，540nm 處蒸餾水調(diào)
零，記錄各管吸光值A ，記為 A 測定管、A 對照管、A 標(biāo)準(zhǔn)管、A 空白管。計算ΔA=A 測定管-A 對照 管，ΔA 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。
三、S-AI 活性計算：
1 、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
以葡萄糖濃度為 x 軸，相應(yīng)的ΔA 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b；將ΔA 帶 入公式得到 x ( mg/mL)
2 、 S-AI 活性計算
單位定義：37℃每 g 土壤每天產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個酶活性單位。
S-AI (U/g) =x×V 酶促÷W÷T
V 酶促：酶促反應(yīng)總體積，0.820mL；W：樣本鮮重，g；T：反應(yīng)時間：1/24d；
注意事項：
1 、如果加入試劑三，煮沸 10min 后有混濁物出現(xiàn)，建議離心除去沉淀 (10000rpm ，2min ) ，取上 清測定吸光度；
2 、如果吸光值大于 1 ，可以將上清液再進(jìn)行稀釋；若吸光值較小，可以減少上清液稀釋倍數(shù)。兩種 操作均要注意改變公式中的稀釋倍數(shù)。
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